افزایش بازدهی روش طبیعی استفاده از محیط اسپیزیزن برای انتقال پلاسمید به درون باکتری باسیلوس سوبتیلیس با استفاده از یک پپتید کاتیونیک تراوا کننده غشا باکتریایی

نویسندگان

  • حسین آقاملایی دانشجوی دکتری تخصصی زیست فناوری پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران
  • محمد افتخاری شیرکوهی ‏ دانشجوی دکتری تخصصی زیست فناوری پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران
  • محمد هیئت دانشجوی دکتری تخصصی زیست شناسی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران،
چکیده مقاله:

مقدمه: تعدادی از گونه‌های باکتریایی قادرند تا مولکول DNA را از محیط اطرافشان در‌یافت نمایند؛ میزان این دریافت به شرایطی مانند بزرگی پلاسمید و نوع میزبان بستگی دارد. در مورد باکتری باسیلوس سوبتیلیس نیز این امکان البته با میزان انتقال بسیار پایینی وجود دارد. در حال حاضر روش مرسوم برای انتقال پلاسمید خارجی به درون باکتری باسیلوس سوبتیلیس استفاده از روش طبیعی در یک محیط کشت حداقل (اسپیزیزن) است. در این روش نیز میزان انتقال مطلوب و در خورتوجه نیست. هدف از این مطالعه، بررسی تکنیکی نوین بر پایه پپتید کاتیونیک CM11 به عنوان بک پپتید تراوا کننده غشاء، برای افزایش مؤثر نرخ ترانسفورماسیون DNA به باکتری باسیلوس سوبتیلیس است. مواد و روش‏‏ها: در این روش، از پپتید CM11 به عنوان عاملی برای بهینه‏سازی انتقال pWB980 به باکتری باسیلوس سوبتیلیس استفاده شد. برای این منظور، فرآیند مستعد‏سازی باسیلوس سوبتیلیس با دو روش مجزا و در حضور غلظت‌های مختلف پپتید انجام شد. بدین ترتیب که در روش نخست، باکتری به مدت 14 ساعت در حضور غلظت‌های مختلف پپتید تیمار شد و سپس در معرض پلاسمید قرار گرفت. در روش دوم، غلظت‏ها‏ی مختلف پپتیدی همراه با پلاسمید به شکل همزمان به باکتری عرضه شد. پس از غربال‏گری باکتری‏ها‏ی دریافت کننده پلاسیمد بر روی محیط کشت LB آگار حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین تعداد کل باکتری‏ها‏ی ترانسفورم شده به ازای هر میکرو‏گرم DNA پلاسمیدی محاسبه و با کنترل مقایسه شد. نتایج: انتقال پلاسمید pWB980 به باکتری در بهترین حالت معادل 5/6 برابر بیشتر از شرایط استاندارد (کنترل) گزارش شد که از لحاظ آماری دارای اختلاف معنی داری بود (P value

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

طراحی روشی نوین بر پایه پپتید های تراوا کننده غشا جهت افزایش بازدهی انتقال DNA خارجی به باکتری اشرشیاکولی

سابقه و هدف: انتقال DNA خارجی با بازدهی بالا به داخل باکتری از مهمترین مراحل در زیست فناوری میکروبی می‌باشد. برای این منظور چند روش مرسوم است که در بین آن‌ها روش کلسیم کلراید سرد از جمله مهمترین و ارزان‌ترین روش‌ها جهت انتقال DNA به درون سلول‌های باکتریایی گرم منفی مانند Escherichia coli می‌باشد. به طور معمول بازدهی انتقال DNA در این روش107- 105 کلونی برای یک میکروگرم از DNA خارجی می‌باشد. با...

متن کامل

طراحی روشی نوین بر پایه پپتید های تراوا کننده غشا جهت افزایش بازدهی انتقال dna خارجی به باکتری اشرشیاکولی

سابقه و هدف: انتقال dna خارجی با بازدهی بالا به داخل باکتری از مهمترین مراحل در زیست فناوری میکروبی می باشد. برای این منظور چند روش مرسوم است که در بین آن ها روش کلسیم کلراید سرد از جمله مهمترین و ارزان ترین روش ها جهت انتقال dna به درون سلول های باکتریایی گرم منفی مانند escherichia coli می باشد. به طور معمول بازدهی انتقال dna در این روش107- 105 کلونی برای یک میکروگرم از dna خارجی می باشد. با ت...

متن کامل

فراوانی ژنpxo1 در باسیلوس سرئوس، باسیلوس تورنجینزیس و باسیلوس سوبتیلیس با استفاده از تکنیک SDS-PAGE

زمینه و هدف: در بین باسیلوس ها، باسیلوس سرئوس، باسیلوس تورنجینزیس و باسیلوس آنتراسیس دارای اهمیت زیادی می باشند که از میان آن ها باسیلوس آنتراسیس عامل بیماری سیاه زخم می باشد. تولید توکسین در باسیلوس آنتراسیس توسط ژن pxo1 و پلاسمید مربوط به آن صورت می گیرد. اخیرا در تحقیقات نشان داده شده است که این ژن به سایر باسیلوس های یاد شده در فوق نیز انتقال یافته است. هدف این مطالعه جستجو و تعیین فراوانی ...

متن کامل

بیان سطحی آنزیم کیتیناز در باکتری باسیلوس سوبتیلیس با استفاده از سیستم آنزیمی سورتاز به منظور تولید یک قارچکش طبیعی

در سال های اخیر، تغییر سطح سلول های زنده کاربردهای فراوانی در زمینه های بیوتکنولوژی، ایمونولوژی و میکروبیولوژی داشته است. در این بین تغییر سطح سلول های باکتریایی به عنوان مهمترین میکرو ارگانیسم های مورد استفاده در صنایع بیوتکنولوژی، مورد علاقه محققین بسیاری بوده است. بیان و اتصال پروتئین های هترولوگ به سطح سلول، یکی از راه های تغییر سطح سلول های باکتریایی می باشد. در باکتری های گرم مثبت، یک یا ...

غنی‌سازی آرتمیا، Artemia franciscana با استفاده از پروبیوتیک‌های باکتریایی باسیلوس

در این تحقیق توانایی غنی‌سازی ناپلی آرتمیا (Artemia franciscana) با دو پروبیوتیک باسیلوس در دو مکانیسم غنیسازی، کپسوله شدن زیستی و اتصال به سطح بدن، مورد بررسی قرار گرفت. پروبیوتیک‌های مورد آزمایش Bacillus subtilis و B.lecheniformis بود که در دو غلظت (103 و 106 سلول در هر میلی لیتر) مورد استفاده قرار گرفت. نتایج نشان داد که هر دو سویه باکتری توانستند به‏طور موفقیت‌آمیزی درون آرتمیا کپسوله شوند ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 2  شماره 6

صفحات  31- 40

تاریخ انتشار 2013-06-22

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023